Κεφάλαιο 4: Τεχνολογία του ανασυνδυασμένου DNA

ΟΛΟ το κεφάλαιο είναι εντός ύλης.

Δημιουργία ανασυνδυασμένου DNA

Σημείωση: Προσοχή στην εικόνα 4.4 σελ.59 (βακτηριοφάγοι λ)

Διαφορές γονοδιωματικής και cDNA βιβλιοθήκης

Αλυσιδωτή αντίδρασης πολυμεράσης (PCR)

Μεθοδολογία ασκήσεων:

Προσοχή στις λεπτομέρειες!

• Κάθε περιοριστική ενδονουκλεάση σε μία θέση αναγνώρισης προκαλεί τη διάσπαση δύο φωσφοδιεστερικών δεσμών.

• Ένα πλασμίδιο δεν μπορεί να ενσωματώσει πάνω από ένα κομμάτι ξένου DNA.

• Ένα βακτήριο δεν μπορεί να μετασχηματιστεί με πάνω από ένα ανασυνδυασμένα πλασμίδια.

• Τα βακτήρια μετά την ειδική κατεργασία με την οποία αυξάνεται η ικανότητά τους να δέχονται βιολογικά μακρομόρια μπορεί να περιέχουν ανασυνδυασμένα πλασμίδια, μη ανασυνδυασμένα πλασμίδια (έγιναν κυκλικά χωρίς να παραλάβουν ξένο DNA), αλλά και να μην περιέχουν καθόλου πλασμίδια.

•  Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) είναι μέθοδος κλωνοποίησης ενός κομματιού DNA.

• Οι περιοριστικές ενδονουκλεάσες αναγνωρίζουν δίκλωνα τμήματα DNA και κόβουν σε καθορισμένες θέσεις. Το πόσο εύκολα ή δύσκολα θα αποδιαταχθούν οι δύο αλυσίδες του DNA εξαρτάται άμεσα από το πλήθος των δεσμών υδρογόνου που σχηματίζουν. Όσα περισσότερα ζεύγη G-C διαθέτουν τόσο περισσότεροι δεσμοί θα χρειαστεί να σπάσουν (εννοείται σε σύγκριση μεταξύ δύο τμημάτων που έχουν το ίδιο μήκος).

• Το μιτοχονδριακό DNA δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως φορέας κλωνοποίησης, καθώς, αν και συνήθως είναι μικρά κυκλικά μόρια, αντιγράφονται ανεξάρτητα και μπορεί να διαθέτουν μία μόνο φορά τη θέση αναγνώρισης για μία περιοριστική ενδονουκλεάση, δε διαθέτουν γονίδια ανθεκτικότητας σε αντιβιοτικά. Η μη ύπαρξη αυτών των γονιδίων θα καταστήσει δύσκολη την επιλογή των μετασχηματισμένων κυττάρων. • Ένζυμα που χρησιμοποιούνται στην κατασκευή μίας γονιδιωματικής βιβλιοθήκης είναι οι περιοριστικές ενδονουκλεάσες και η DNA δεσμάση.

• Ένζυμα που χρησιμοποιούνται στην κατασκευή μίας cDNA βιβλιοθήκης είναι η αντίστροφη μεταγραφάση, η DNA πολυμεράση, οι περιοριστικές ενδονουκλεάσες και η DNA δεσμάση.

Λύση άσκησης 12 σχολικού βιβλίου:

Παρακάτω θα βρεις φυλλάδια ασκήσεων: